細胞瞬時轉染技術服務?
服務編碼
|
項目名稱
|
項目報價
|
項目周期
|
BT5001
|
細胞培養(yǎng)
|
2000元
|
1-2周
|
BT5002
|
細胞瞬時轉染
|
3000元
|
1-2周
|
BT5003
|
穩(wěn)定細胞系構建
|
咨詢
|
咨詢
|
一、服務內容
1、細胞轉染和穩(wěn)定表達細胞株篩選
通過轉染試劑或電穿孔方式等方式,將目的基因導入貼壁細胞或懸浮細胞24-48小時后,目的基因即在細胞內表達。此時為了建立穩(wěn)定細胞系,可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標記,選用相應的藥物對靶細胞進行篩選,從而得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞克隆。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)。
2、針對不同種類細胞使用藥物,低氧,壓力等外源因素進行刺激等處理,建立相關的細胞模型,從而進行后續(xù)的研究工作。
二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)
1、干冰運輸:取對數(shù)生長期的細胞,消化后低速離心1000rpm,5min收集細胞,加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細胞分裝入凍存管中,標明細胞的名稱、細胞代次、凍存時間及操作者;放4℃冰箱30min,-20℃30min到1h,-80℃過液,然后放入液氮罐;細胞數(shù)目不少于5×106/ml;
2、常溫運輸:細胞貼壁覆蓋瓶底面積達40%以上時,裝滿培養(yǎng)液,瓶口用封口膜封好,裝入盒子,盒子里用泡沫或棉花塞滿,讓瓶子固定在盒子中。
三、服務特點
1、針對不同細胞系篩選合適的轉染試劑和質粒濃度配比,提高轉染效率和蛋白表達量
2、豐富的抗生素篩選經驗和單細胞克隆鑒定方法提高實驗效率
3、構建的穩(wěn)定表達細胞株可穩(wěn)定傳代,極少發(fā)生性狀丟失
四、收費標準
服務項目
|
收費標準¥
|
實驗周期
|
蛋白瞬時表達或敲低
|
基因表達或敲低載體構建
|
請參見載體構建目錄
|
2-3周
|
質粒大提(含去內毒素)
|
700/質粒
|
1周
|
載體轉染
|
3000/樣品
|
1周
|
Western Blot檢測蛋白表達或敲低
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
蛋白穩(wěn)定表達細胞株構建(混合克隆)
|
表達載體構建
|
請參見載體構建目錄
|
2-3周
|
質粒大提(含去內毒素)
|
700/質粒
|
1周
|
轉染和抗生素篩選
|
40000/細胞系
|
3-4周
|
Western Blot檢測穩(wěn)定細胞株蛋白表達
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
蛋白穩(wěn)定表達細胞株構建(單克隆)
|
表達載體構建
|
請參見載體構建目錄
|
2-3周
|
質粒大提(含去內毒素)
|
700/質粒
|
1周
|
轉染和抗生素篩選
|
50000/細胞系
|
6-8周
|
Western Blot檢測穩(wěn)定細胞株蛋白表達
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
蛋白敲低細胞系構建(單克隆)
|
shRNA表達載體的構建
|
請參見載體構建目錄
|
2-3周
|
質粒大提(含去內毒素)
|
700/質粒
|
1周
|
轉染和抗生素篩選
|
60000/細胞系
|
6-8周
|
Western Blot檢測敲低細胞株蛋白表達
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
蛋白真核表達(分泌表達)
|
分泌型表達載體的構建
|
請參見載體構建目錄
|
2-3周
|
質粒大提(含去內毒素)
|
700/質粒
|
1周
|
細胞轉染
|
3000/質粒
|
2周
|
蛋白表達檢測(Western Blot或 ELISA)
|
2000/目的蛋白/膜;600/板
|
2周
|
蛋白表達和純化
|
20000/mg
|
2周
|
五、客戶提供材料
1、待克隆基因和載體信息,待敲低基因信息和shRNA序列信息(如無相關shRNA序列信息,本公司可代為設計并收取相關費用;
2、待轉染細胞株(如需使用常用腫瘤細胞株,如293/293T、HeLa等可由本公司提供);
3、陽性對照樣品(盡量提供)
4、相關文獻(可選)
六、提交給客戶結果
1、構建完成的載體和甘油菌株;
2、完整測序報告和序列堿基圖
3、載體真核表達鑒定結果
4、載體真核表達蛋白
5、穩(wěn)定表達細胞株>1×107
6、穩(wěn)定敲低細胞株>1×107
7、完整實驗報告(包括基因擴增圖,細胞株過表達和敲低檢測結果圖等)